Far-eastern blot

Si ce bandeau n'est plus pertinent, retirez-le. Cliquez ici pour en savoir plus.
Si ce bandeau n'est plus pertinent, retirez-le. Cliquez ici pour en savoir plus.

Cet article ne s'appuie pas, ou pas assez, sur des sources secondaires ou tertiaires ().

Pour améliorer la vérifiabilité de l'article ainsi que son intérêt encyclopédique, il est nécessaire, quand des sources primaires sont citées, de les associer à des analyses faites par des sources secondaires.

Le far-eastern blot est une technique de biologie moléculaire par transfert de molécules développée par T. Taki en 1994 [1],[2] pour analyser les lipides puis adaptée à d'autres molécules (métabolites, hormones, médicaments, etc.)

Principe

Principe des techniques de transfert de molécules.
Dans un far-eastern blot, l'électrophorèse est remplacée par une chromatographie sur couche mince.

Cette technique se déroule en 3 étapes : la séparation des molécules à analyser, le transfert sur une membrane de PVDF puis la détection de ces molécules. Contrairement aux autres techniques de transfert qui utilisent préférentiellement l'électrophorèse comme méthode de séparation, le far-eastern blot utilise la chromatographie sur couche mince haute-performance, compatible avec les molécules hydrophobes ou non-ioniques. Après le transfert sur une membrane, plusieurs méthodes de détection peuvent être utilisées :

  • des tests de liaison de ligands : on incube la membrane avec molécules marquées susceptibles d'interagir avec les molécules à analyser. On peut étudier ainsi l'interaction des lipides d'une membrane cellulaire avec différents types de ligands (anticorps, lectines, bactéries, virus, toxines, etc.) ou l'action d'enzymes sur une membrane cellulaire.
  • l'identification directe par spectrométrie de masse[3], qui peut apporter des informations sur la structure des molécules à analyser.

Il est également possible d'utiliser cette technique sans séparation (technique du dot blot).

Notes et références

  1. ↑ (en) Taki T., Handa S. and Ishikawa D., « Blotting of Glycolipids and Phospholipids from a High-Performance Thin-Layer Chromatogram to a Polyvinylidene Difluoride Membrane », Analytical Biochemistry, vol. 221, no 2,‎ , p. 312-316 (lire en ligne)
  2. ↑ (en) Taki T., Kasama T., Handa S. and Ishikawa D., « A Simple and Quantitative Purification of Glycosphingolipids and Phospholipids by Thin-Layer Chromatography Blotting », Analytical Biochemistry, vol. 223, no 2,‎ , p. 232-238 (lire en ligne)
  3. ↑ Taki T., Ishikawa D., Handa S. and Kasama T.
    Direct Mass Spectrometric Analysis of Glycosphingolipid Transferred to a Polyvinylidene Difluoride Membrane by Thin-Layer Chromatography Blotting
    Analytical Biochemistry Volume 225, Issue 1, February 1995, Pages 24-27
  • icône décorative Portail de la biochimie
  • icône décorative Portail de la biologie cellulaire et moléculaire